目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基於(yu) 實時熒光定量PCR的核酸檢測技術在新冠病毒快速鑒定及確診中發揮了重要作用。

什麽(me) 是實時熒光定量PCR?

實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術，簡稱qPCR,是在PCR反應體(ti) 係中加入熒光物質(熒光染料或熒光標記的特異性探針)，利用熒光信號積累實時監測整個(ge) PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

與(yu) 普通PCR相比，實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍。運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、絕對定量和定性分析。

實驗流程：

在實時熒光定量PCR實驗中，可以分為(wei) 樣本采集，RNA提取，RNA質量鑒定，反轉錄及數據分析幾個(ge) 步驟，在進行引物、模板的稀釋，試劑的配製和補足反應體(ti) 係時都會(hui) 用到水，水質量的好壞直接影響最終數據分析的結果。

水中的顆粒物，離子含量，有機物及細菌微生物等雜質對實驗都會(hui) 帶來影響，最值得關(guan) 注的因素有以下兩(liang) 個(ge) 方麵：

1. DNA酶和RNA酶

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進行實時熒光定量PCR時，去除這兩(liang) 種酶從(cong) 而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關(guan) 鍵。尤其在提取RNA的時候，RNA極易被降解。這是因為(wei) RNase非常穩定，且無處不在，用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑製劑不能使所有的RNase完全失活。如果樣本中的核酸被降解，會(hui) 影響檢測結果的準確性，甚至造成假陰性檢測結果。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對實驗的影響。

2. 鎂離子

實時熒光定量PCR實驗需要根據不同的引物對和模板確定最佳的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過低，會(hui) 影響DNA聚合酶的活性，導致產(chan) 量降低，影響實時定量的敏感性;

Mg2+濃度過高，會(hui) 增加引物二聚體(ti) 的形成，這會(hui) 影響特異性。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須控製Mg2+濃度，避免背景因素帶來的不確定性。

綜上，實時熒光定量PCR實驗推薦使用超純水，水質要求如下圖所示：