SDS聚丙烯酰胺凝膠染色是蛋白質研究的一個(ge) 基礎方法。染色方法有很多，實際應用中，考馬斯亮藍染色(考染)和銀染是運用的最多的方法。考馬斯亮藍G250在遊離狀態下呈紅色，它與(yu) 蛋白質結合後變為(wei) 藍色，結合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與(yu) 蛋白質含量成正比，因此可用於(yu) 蛋白質的定量測定。

銀染實驗中，在堿性條件下，銀離子被還原成金屬銀，沉澱在蛋白質的表麵上顯色。蛋白電泳後的 SDS-聚丙烯酰胺凝膠在甲醇溶液中浸泡後，水洗後用硝酸銀溶液銀染，再水洗後用碳酸鈉甲醇水溶液顯色。

與(yu) 考染相比，銀染具有靈敏度高的優(you) 點，很多做環境、植物、育種等方麵的客戶，都會(hui) 做銀染方麵的實驗。銀染對於(yu) 試劑的要求比較高，尤其對其中使用純水的水質要求比較高。

一、儀(yi) 器和試劑

乙酸(1%)，顯影液(2.5%碳酸鈉和0.02%甲醛水溶液)，乙醇(30%)，固定液(乙醇:冰醋酸:水(30:10:60))，硝酸銀溶液(0.1%)，顯影液(將溶液A在850 mL去離子水中加入37 g NaCl和37 g CuSO4，再加入濃氨水直到深藍色沉澱形成然後溶解，定容至1 L)和溶液B(在900 mL去離子水中加入436 g 硫代硫酸鈉，定容至1 L)混合，加三倍水稀釋，立即使用

二、試驗方法

1. 通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質;

2. 將凝膠浸泡在至少5倍體(ti) 積的固定液中，室溫下平緩搖動4 - 12 h，使蛋白固定;

3. 棄去固定液，加至少5倍體(ti) 積的30%乙醇，室溫下平緩搖動30 min;

4. 重複步驟3;

5. 棄去乙醇，加10倍體(ti) 積的純水(去離子水)，室溫下平緩搖動10 min;

6. 重複步驟5兩(liang) 次;

7. 棄去清洗用水，加5倍體(ti) 積的硝酸銀溶液，室溫下平緩搖動30 min;

8. 棄去硝酸銀溶液，用純水(去離子水)漂洗凝膠兩(liang) 麵，每麵20 s;

9. 加5倍體(ti) 積的新鮮顯影液，室溫下平緩搖動，數分鍾內(nei) 出現蛋白質的染色條帶，繼續至條帶清晰;

10. 用1%乙酸清洗凝膠終止反應，再用純水(去離子水)水漂洗數次，每次10 min。

銀染後的凝膠可以通過凝膠成像係統或掃描儀(yi) 轉化為(wei) 照片，或者可以直接用手機拍攝。

在銀染實驗中，純水(去離子水)水質非常重要，對實驗成功與(yu) 否起著關(guan) 鍵性的作用。有用戶在實驗中忽略了這一點，純水水質不佳，導致氯離子含量超標，浸泡時出現硝酸銀沉澱，沉澱在膠上，最後顯影的時候看到的是一片花花的亂(luan) 象，影響了染色效果。

氯化銀的溶解度通常是2 ppm，氯離子是水中常見的一種離子雜質，如果水中的氯離子超過2 ppm，即有可能出現雜質，也就是說，對於(yu) 銀染實驗，對於(yu) 純水質量的要求還是比較苛刻的，一般的反滲透純水(RO)設備，還難以達到要求。

另外，水中的顆粒物也會(hui) 吸附銀離子沉澱顯色，汙染背景，甚至讓好好的凝膠成了“大花臉”。因此製備出來的純水在使用前，還應該通過0.22或0.45μm的過濾器預先過濾，以去除水中的顆粒物。

專(zhuan) 業(ye) 來講，銀染用水應該盡量選用符合國標《分析實驗室用水規格和試驗方法》(GB/T 6682-2008二級純水以上的水—電導率至少應當在 1 μS/cm以下。

因此，銀染用水應當使用EDI純水或者超純水，而RO 純水是不能滿足銀染用水需求。

國內(nei) 做實驗室EDI純水設備的廠家很少。滲源是國內(nei) 最早生產(chan) EDI實驗室純水設備的供應商。滲源新一代SYH智能型一體(ti) 化超純水係統可以同時製備EDI 純水和超純水。SYH生產(chan) 的 EDI 純水水質完全滿足銀染實驗，還可以用來配製其他相關(guan) 實驗的試劑;超純水可以應用於(yu) 銀染實驗的上下遊以及其他蛋白質研究實驗，例如蛋白SDS-PAGE電泳、Western Blotting等。取水終端安裝的終端微濾器，可以製備無熱原(內(nei) 毒素)、核酸酶、細菌的超純水，用於(yu) 生化分析和分子生物學。