今天帶大家走入核酸檢測的常用方法PCR方法，以及如何在PCR檢測過程中降低檢測結果假陰性概率。

一、什麽(me) 是PCR技術?

PCR技術又稱為(wei) 聚合酶鏈式反應。是一種放大DNA片段的分子生物學技術，PCR最大的特點是能夠將微量的DNA進行大幅度的放大，方便進行觀察其反應。

在今年流行的新冠病毒中核酸檢測被定義(yi) 為(wei) 臨(lin) 床診斷的金標準，RT-PCR技術被反複提到，它是一種將RNA反轉錄和PCR相結合的技術。首先在反轉錄酶的作用下，將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為(wei) 模板，在DNA聚合酶作用下不斷擴增(變性-退火-延伸多個(ge) 循環)合成目的片段並進行分析。

二、PCR用水

PCR技術目前多搭配試劑盒使用，也有用戶自行製備反應體(ti) 係，無論哪個(ge) 過程都需要使用水。無論是近年來季節性爆發的甲流乙流，還是目前都在經曆的病毒，在檢測過程中都涉及一個(ge) 痛點，那就是如何盡可能提高核酸檢測的準確性，減少假陰性結果出現的可能性。

我們(men) 首先分析一下假陰性結果出現的原因，以病毒核酸檢測為(wei) 例，假陰性的主要原因有:

1、病人病程:不同病程，患者體(ti) 內(nei) 病毒載量不同;

2、采樣部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同;

3、采樣準確性:拭子質量，工作人員操作等;

4、試劑盒的質量:引物設計以及水質控製。

為(wei) 了順利將提取到的RNA反轉錄並實現DNA的成功擴增，必須抑製核糖核酸酶(RNases)的降解作用，如果試劑盒用水內(nei) 含RNases，將極有可能導致假陰性結果的出現。

三、去除RNases的主要方法

1、高壓滅菌：即便是在180°C下高壓滅菌4h之後，RNases仍保持某些活性，且某些細菌失活會(hui) 釋放更多的RNases;

2、DEPC法(二乙基焦碳酸酯處理法) 利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 處理方法使酶失活是用來抑製水溶液中RNases活性的常見方法。然而，二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物，處理須小心：同時該方法雖然能夠使酶失活，卻無法將其從(cong) 水中去除，同時清除多餘(yu) 的DEPC過程中，會(hui) 產(chan) 生乙醇，二氧化碳等其他汙染物;

3、超濾法:超濾是一種真正能夠從(cong) 水溶液中清除RNases的方法。

四、超濾膜介紹

超濾膜被大量用於(yu) 水處理工程。超濾技術在反滲透預處理、飲用水處理、中水回用等領域發揮著越來越重要的作用。超濾技術在酒類和飲料的除菌與(yu) 除濁，藥品的除熱原以及食品及製藥物濃縮過程中均起到關(guan) 鍵作用。

超濾過濾孔徑和截留分子量的範圍一直以來定義(yi) 較為(wei) 模糊，一般認為(wei) 超濾膜的過濾孔徑為(wei) 0.001-0.1微米，截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)為(wei) 1,000-1,000,000 Dalton。嚴(yan) 格意義(yi) 上來說超濾膜的過濾孔徑為(wei) 0.001-0.01微米，截留分子量為(wei) 1,000-300,000 Dalton。若過濾孔徑大於(yu) 0.01微米，或截留分子量大於(yu) 300,000 Dalton的微孔膜就應該定義(yi) 為(wei) 微濾膜或精濾膜。

一般用於(yu) 水處理的超濾膜標稱截留分子量為(wei) 30,000-300,000 Dalton，而截留分子量為(wei) 6,000-30,000 Dalton 的超濾膜大多用於(yu) 物料的分離、濃縮、除菌和除熱源等領域。

五、超純水機推薦

SYZ-VF實驗室超純水機具備持續的水質監測功能。這款產(chan) 品的設計緊湊，外觀精美，一體(ti) 化鑄成工藝，不論是穩定性還是設備本身的剛性都得到了極大的提升，能適用於(yu) 眾(zhong) 多的實驗室科室選擇，是動植物細胞培養(yang) 、基因研究、試管嬰兒(er) 等生命科學實驗室的理想選擇。